Микитась Ольга Владимировна

Микробиолог-эмбриолог

Часто можно слышать вопрос, кто такой эмбриолог и чем он занимается?

Эмбриолог– это человек, который занимается подготовкой репродуктивных клеток и получением эмбрионов.

Какие же процедуры выполняет эмбриолог?

В самом начале пути эмбриолог делает спермограмму– оценивает эякулят мужчины по основным показателям для определения тактики лечения.

В протоколе ЭКО/ИКСИ эмбриолог производит манипуляции со спермой, фолликулярной жидкостью. Ему надо обработать полученный материал, выделить из него «чистые» яйцеклетки (ооциты) и сперматозоиды, провести оплодотворение. После этого эмбриолог создает условия и поддерживает культивирование эмбрионов; после оценки развития на стадии бластоцисты эмбрионы врач репродуктолог переносит в полость матки будущей мамы.

При этом сохранение жизнеспособности эмбрионы и половые клетки можно поддерживать достаточно длительное время и данные репродуктивные клетки всегда в распоряжении будущих родителей. Для этого эмбриолог использует методы криоконсервации – новейший способ замораживания с последующим размораживанием сперматозоидов, ооцитов и эмбрионов.

Кроме того, эмбриолог может участвовать в целом ряде анализов эмбрионов и половых клеток, начиная с простого посткоитального теста , теста на «иммунное бесплодие», и заканчивая биопсией клеток эмбриона для генетического анализа.

Рассмотрим подробнее каждый вид манипуляций

Что же такое спермограмма?

Спермограмма – анализ эякулята, во время которого производится как количественная так и качественная оценка сперматозоидов. Данный анализ позволяет врачу репродуктологу оценить фертильность мужчины. Основные показатели, которые оцениваются при данном исследовании – это количество сперматозоидов в одном миллилитре, их подвижность и морфология (строение). Про спермограмму следует знать несколько особенностей. Данный показатель достаточно лабильный и может меняться от высоких до низких показателей. Цикл созревания сперматозоида составляет около 3-х месяцев, поэтому результат, который был получен в день сдачи, отображает картину сперматогенеза, которая происходила на протяжении 3-х месяцев, а не последних 5-ти дней.

Как подготовиться к спермограмме?

  1. Половое воздержание 3-5 дней;
    2. Не употреблять алкогольные напитки 7-14 дней;
    3. Не посещать сауну, не принимать горячие ванны, и не находится в горячих помещениях длительное время за 7-10 дней;
    4. По возможности за 2,5 месяца исключить факторы хронической интоксикации (курение, алкоголь, наркотики, производственные вещества, лекарственные препараты);
    5. По возможности исключить физические и психоэмоциональные нагрузки за 3-5 дней до сдачи эякулята.

Что ухудшает показатели спермы:
– нервный стресс и хроническое недосыпание;
– неправильное питание;
– злоупотребление алкоголем и курение;
– прием антибиотиков и наркотические вещества любого вида;
– сауна, сиденье с подогревом и стягивающее белье (перегрев яичек ухудшает развитие сперматозоидов);
– перенесенное накануне заболевание, сопровождающееся высокой температурой тела;
– сосудистые заболевания, в частности варикоцеле.

Что НЕОБХОДИМО для улучшения показателей спермограммы?

  1. Занятия спортом – доказано, что здоровые и регулярные физические нагрузки нормализуют гормональный фон человека, что благоприятно влияет на сперматогенез. Также улучшается циркуляция крови во всем организме, что очень полезно, на фоне сидячей работы, как профилактика застойных явлений.
    2. Отдых и здоровый сон – постарайтесь нормализовать ваш распорядок дня и выделять достаточное количество времени на восстановление и сон.
    3. Постарайтесь отказаться от вредных привычек, ведь дети – это намного большее чем просто пристрастие к табаку и алкоголю. Счастье отцовства не сравнимо ни с чем!
    4. Здоровое питание – правильно питайтесь. Исключите вредную жареную и жирную пищу. А за несколько дней до сдачи спермограммы, кушайте сладкие фрукты, поскольку именно фруктоза является энергетическим субстратом для сперматозоидов.

Посткоитальный тест – это тест определения подвижных сперматозоидов в слизи цервикального канала после непредохраненного полового акта, через 5-6 часов.
Кому показан?
Данное исследование рекомендуют проводить для диагностики иммунологического бесплодия (наличие антиспермальных антител в шеечной слизи) и при бесплодии неясного генеза;

Как проводится?

После полового акта без применения различных средств контрацепции, женщине рекомендуется не вставать 45-60 минут (время разжижения спермы), что бы сперма не вышла из влагалища. Рекомендуется лежать, немного приподняв таз. Спустя 5-6 часов, женщина должна прийти к гинекологу для взятия цервикальной слизи, которая передается в лабораторию для идентификации и подсчета подвижных сперматозоидов.
Результат может быть положительный, сомнительный, негативный.
Положительный результат – это наличие в поле зрения 5-10 сперматозоидов с прямолинейным движением.
Сомнительный – это наличие менее 5 сперматозоидов с прямолинейным движением или присутствие сперматозоидов с маятникообразным движением. Отрицательный – сперматозоиды не обнаружены или неподвижны.
Данный тест необходимо проводить в период овуляции, когда состав цервикальной слизи наиболее благоприятный для проникновения сперматозоидов.

Внутриматочная инсеминация (ВМИ) – процедура введения специально подготовленных сперматозоидов в полость матки через цервикальный канал, при помощи специального тонкого катетера.

Кому показана?
Данная процедура показана женщинам с «шеечным фактором» бесплодия. Другими словами – если цервикальная слизь слишком густая и сперматозоиды не могут проникнуть через неё, или в слизи есть антиспермальные антитела, которые обездвиживают сперматозоиды. Это делает цервикальную слизь не дружелюбной к сперматозоидам. Данная процедура позволяет ввести сперматозоиды непосредственно в полость матки, приблизив их к яйцеклетке и исключив контакт с цервикальной слизью.

ВМИ показана женщинам при:
– наличии антиспермальных антител в цервикальной слизи
– овуляторной дисфункции, которая поддается терапии
– вагинизме.

Помимо показаний женского фактора бесплодия, существуют показания связанных с состоянием здоровья мужчины:
– умеренно сниженные подвижность и концентрация сперматозоидов
– ретроградная эякуляция и другие сексуальные расстройства
– гипоспадия
– олигоспермия
– высокая вязкость семенной жидкости
– наличие антиспермальных антител
– использование криоконсервированной спермы (при онкологическом заболевании мужа, лечение которого в будущем предполагает применении химиотерапии).

Как это происходит?

Мужчина в течении 1-3 часов два раза сдает сперму, что позволяет эмбриологу выделить и сконцентрировать большее количество сперматозоидов, достигнув необходимой концентрации для оплодотворения и наступления беременности.
Инсеминацию проводят применяя сперму мужа или донора. Все доноры нашей клиники проходят детальное обследование, что исключает возможность передачи инфекционных или генетических заболеваний. Женщина может воспользоваться биологическим материалом анонимного донора, так и выбрать самостоятельно будущего отца своего ребенка (не анонимное донорство).

Противопоказания к ВМИ:
– непроходимость маточных труб, поскольку оплодотворение яйцеклетки при этом методе лечения происходит в самой трубе, также как и при естественном зачатии;
– острые воспалительные гинекологические заболевания;
– ановуляторный синдром (отсутствие овуляции), который не поддается лечению;
– эндометриоз тяжелой степени;

– снижение концентрации сперматозоидов (олигозооспермия), при которой две спермограммы подтверждают наличие менее 10 млн/мл подвижных сперматозоидов;
– азооспермия;

– врожденные дефекты развития матки, приобретенные изменения (полипы, синехии, субмукозные фибромиомы);
– злокачественные новообразования любой локализации.

Как проводится данная процедура?
Мужчина сдает сперму (1 или 2 раза), из которой в лаборатории осаждают сперматозоиды. Ведь в сперме помимо сперматозоидов, содержится большое количество других компонентов: секрет предстательной железы, парауретральных желез, различные ферменты, белки и небольшое количество других клеток (эпителиальные клетки, лейкоциты, клетки сперматогенеза, макрофаги).

В неподготовленном виде, введение спермы мужчины в полость матки опасно для жизни женщины, поскольку может вызвать анафилактический шок! Именно поэтому, в процессе обработки спермы, выделяется чистый концентрат половых клеток мужчины, который вводится в полость матки, делая процедуру абсолютно безболезненной и безопасной для женщины.

Инсеминацию чаще всего выполняют 2 раза: до и во время овуляции. При необходимости, врач репродуктолог, может назначить низкие дозы лекарственных препаратов для повышения вероятности наступления беременности. Если после 2-4 процедур беременность не наступила, рекомендовано проведение процедуры экстракорпорального оплодотворения (ЭКО).
Подготовка мужчины аналогична, как и при спермограмме.

ЧТО ТАКОЕ ICSI?

Несмотря на устоявшийся термин «стандартное ЭКО (IVF)» применительно к  инсеминации  in vitro, наиболее распространенный метод оплодотворения на сегодня – ICSI (intracytoplasmic sperm injection) –инъекция  сперматозоида в цитоплазму  яйцеклетки. При этом эмбриолог сам отбирает сперматозоид и сам проводит оплодотворение.

Преимущества ICSI

+ Для ICSI необходимо и достаточно найти один живой сперматозоид на каждый  ооцит  (конечно, если он аномальный или неподвижный, шансы резко снижаются). Для IVF необходимо по крайней мере несколько тысяч подвижных сперматозоидов.
+ Хорошо сделанное ICSI дает более высокий процент оплодотворения, чем IVF (особенно – при «плохой» сперме (астено, терато или олигозооспермии).

Проведение ICSI

Для проведения ICSI эмбриолог сам растворяет кумулюс гиалуронидазой и переносит очищенные ооциты в отдельную чашку Петри, в маленькие капельки среды, залитые сверху маслом. В отдельную каплю помещают очищенные сперматозоиды.

Перед проведением самой процедуры оплодотворения эмбриолог оценивает качество полученных ооцитов.

Проведение ICSI.

Проводят ICSI под микроскопом, снабженным нагревательным столиком (чтобы чашка с эмбрионами не остывала) и специальной установкой для ICSI. Установка для ICSI – это два микроманипулятора, с помощью которых управляют двумя микрокапиллярами: первый – для отбора сперматозоида, второй – для удерживания яйцеклетки..

В чашке для ICSI под микроскопом эмбриолог ищет «хороший» сперматозоид, обездвиживает его ударом первого капилляра по хвосту и тщательно осматривает на предмет морфологии. Если сперматозоид его устраивает, эмбриолог засасывает его в капилляр и переносит в каплю с ооцитом. Ооцит (если он пригоден для оплодотворения) присасывают вторым капилляром и первым капилляром вводят в него сперматозоид.

  1. Оплодотворение – 1-й день

На следующее утро после оплодотворения эмбриолог под микроскопом оценивает, как оно прошло и отбирает хорошо оплодотворившиеся яйцеклетки – те, в которых под микроскопом видно два «ядра» (так называемых пронуклеуса).

 Наличие 3-х пронуклесов – неправильный вариант развития.

  1. Дробление – 2-3-ий день

Следующие два дня идет дробление. При этом эмбрион делится на две клетки, затем каждая из них опять на две и т.д. Деления клеток эмбриона на этой стадии идет не синхронно, и поэтому вполне можно видеть эмбрион с нечетным числом клеток.

Жизнеспособность эмбрионов оценивают по размеру клеток (бластомеров) и их форме (чем более круглые и равные между собой бластомеры, тем лучше). Снижают оценку эмбриона наличие вакуолей (полостей внутри клетки) и фрагментация. Кроме того, клетки должны иметь прозрачную и не зернистую цитоплазму (внутреннюю среду).

Цифра в классификации обозначает количество бластомеров, а маленькая буква- их качество:       a – все бластомеры равны по размеру.

b- бластомеры отличаются размерами один от другого более, чем на 25%;

вторая маленькая буква говорит о наличии фрагметации, b-до 25%, с- более 25%.

  1. Компактная морула – 4-ый день

На 3—4 день развития начинается процесс компактизации: бластомеры распластываются друг по другу, создавая слитную механически напряженную структуру, в которой границы клеток практически неразличимы. Это – компактная морула.

Морула, но еще не компактная:

 

 

 

 

 

 

 

После компактизации:

Качество морулы оценивать сложнее всего, но тоже возможно. Чем ближе ее форма к шару (настоящего шара не бывает), тем лучше. Если морула неправильной формы и вся состоит из выступов и впадин, то это – хуже. Также плохо если в эмбрионе несколько отдельных компактных областей. Дополнительно снижают оценку вакуоли и фрагментация.

  1. Бластоциста – 5-6-ой день

На 4—5 день начинается кавитация – расхождение клеток внутри морулы и образование полости между клетками. Полость все больше раздувается за счет закачивания в нее жидкости и постепенно занимает все большую часть эмбриона. Это – стадия бластоцисты. Во все предыдущие стадии эмбрион практически не менялся в размере. Увеличение числа клеток компенсировалось уменьшением их размера. На стадии бластоцисты размер эмбриона тоже начинает расти.

 

 

Общепринятая классификация бластоцист – по Дэвиду Гарднеру: Цифра в начале обозначает степень экспандированности (раздутости) бластоцисты; первая большая буква говорит о качестве эмбриобласта (или внутриклеточной массы,ВКМ). Эмбриобласт это сгусток клеток, расположенный внутри полости бластоцисты, как своеобразное утолщение трофобласта. Из него в будущем образуется собственно эмбрион. Вторая большая буква- о качестве трофобласта. Трофобласт это «пузырь» клеток, окаймляющий внутреннюю полость бластоцисты. Это – будущие оболочки эмбриона.

Качество трофобласта оценивают буквой от A до D, где A – отличный (многоклеточный), C – плохой (всего из нескольких клеток), D – дегенеративный

Качество ВКМ оценивают также, где A – отличная (многоклеточная, компактная), B – похуже (либо меньше клеток, либо они некомпактно лежат), C – плохая (мало клеток, и они лежат совсем некомпактно).

Другие врачи:

Руководитель хирургического направления:
Литвиненко Роман Анатольевич

Акушеры-гинекологи:
Давидкевич Анжела Валерьевна
Мироненко Наталья Александровна
Онищенко Ирина Андреевна
Процько Наталья Викторовна

Репродуктологи:
Романова Ольга Олеговна
Онищенко Ирина Андреевна

Эмбриолог:
Микитась Ольга Владимировна

Маммологи:
Краснопольская Оксана Сергеевна
Мотузюк Игорь Николаевич

Врач семейной медицины:
Гальчанская Галина Юрьевна

Специализация:
Микробиолог-эмбриолог

Стаж работы:
19 лет

Учеба:
1994г.-2000г. Московский Физико-Технический Институт (Государственный Университет), г.Долгопрудный Московской области, Россия
2000г.- диплом инженера- физика, инженера-математика по специальности молекулярная биология и биофизика (тема диплома: «Поиск белков вируса полиомиелита, отвечающих за индукцию апоптоза в клетках Hela». Научный руководитель – член-корреспондент РАМН Агол В.И.).
2000г.-2003г. аспирантура при Московском Физико-Техническом Институте (Государственном Университете), г.Долгопрудный Московской области, Россия

Курсы повышения квалификации:
Май 2013г. Цикл повышения квалификации по теме “Вспомогательные репродуктивные технологии” (специализация для эмбриологов). НИИАГ им. Д.О. Отта РАМН. Санкт-Петербург, Россия.
Октябрь 2013 Интенсивное обучение на рабочем месте с курсом практических тренингов по теме «Проведение ИКСИ». Группа компаний «Мать и Дитя» ЗАО «Компания ИДК» Самара, Россия.
Дополнительная информация
Стажировки в Сша( San Diego) ChemDiv февраль-май 2006, февраль-май 2007

Участвовала в международных конференциях в Париже, Хельсинки и Москве.
Соросовский стипендиат.

Выполняемые процедуры:
Владеет методиками подготовки спермы для проведения внутриматочной инсеминации, ЭКО и ИКСИ, методикой подготовки ооцитов для проведения ЭКО и ИКСИ, методом ЭКО и ИКСИ, а также методикой замораживания ооцитов и эмбрионов методом витрификации. Осуществляет оценку спермы, ее заморозку и проведение посткоитальных тестов.